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载体构建

服务内容:

载体构建

技术简介

载体(vector construction),为把DNA分子运送到受体细胞中去,必须寻找一种能进入细胞、且装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的载体。理想的载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。载体构建即是构建含外源DNA的质粒。

载体构建((vector construction),载体是整个基因工程的基石,是DNA重组技术的核心要素。为了满足研究的需要,我们需要按照自己的意愿有目的的去构建和改造载体,最终实现扩增目标片段或者特定蛋白表达等目的。

 

服务内容

服务项目

分类

目的片段克隆

目的基因片段插入特定载体多克隆位点上,可按客户要求融合表达不同的报告基因、蛋白标签等

载体元件改造

多克隆位点改造,启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造

 常见服务  

载体种类

载体类型

周期

原核表达载体

蛋白纯化pET系列;pGEX-4T-1;等

双元启动子载体

10~15天

真核表达载体

pCDNA3.1;pEGFP-N1;pEGFP-C1;  pDsRed-Monomer-N1等

10~15天

启动子活性检测载体

pGL3-BASIC;pGL4.17等

10~15天

植物表达/干扰载体

pCAMBIA系列;等

20~25天

酵母表达载体

pPIC9k; pYES2等

10~15天

慢病毒载体

慢病毒基因表达载体pCDH-Puro; pCDH-GFP-Puro;

慢病毒干扰载体pLKO.1

20~25天

腺病毒及腺相关载体

 

 

CRISPR/Cas9系统载体

 

 

注:我司现有载体库几乎覆盖实验室常用的各类载体,可为客户免费提供;也可完成客户提供载体的构建服务。

技术优势

虽然载体构建是分子生物学研究中最常用的技术之一,但由于构建目的的多样性,加之实际操作中影响因素较多,对研究者经验要求较高,因而往往费时费力。

本公司拥有长期从事分子生物学工作的丰富经验,集中人力,为您提供高效、快捷的载体构建服务。我们可根据已有载体进行改造方案的设计,完成现有载体不同功能元件的改造,也可以应客户要求将指定片段亚克隆至各种载体。

服务流程(图)

基因全合成或基因克隆(此技术服务可选,客户只需提供基因序列或组织材料即可)——序列审核、引物设计——目的基因片段与载体连接——阳性克隆筛选——测序验证

 

您需要提供的材料

1. 实验材料与相关资料

普通载体构建改造:载体、PCR或者酶切产物、载体图谱、载体来源信息与基因背景资料;

表达载体、报告基因载体、病毒载体:载体、含目的基因的质粒或cDNA模板、载体图谱与序列信息、目标蛋白基因序列与酶切位点信息。

2. 载体构建与改造方案

注:

1. 请确认待改造的载体序列正确,与提供的图谱等信息匹配,构建完成后如需测序并且要求序列完全匹配,则需要您提供全序列信息;

2. 如果您只提供组织或细胞样本,请提供所需克隆基因的NCBI登录号或电子版全序列,并额外收取RNA提取及逆转录的费用;

3.对于本公司已有的载体和模板,我们可以免费提供,详见  载体库。

将获得以下实验结果

1.实验报告:包括序列信息、测序引物、所用酶切位点信息等;

2.测序结果:测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图;

3.构建好的重组质粒(100ng/μL,20μL)及相应的甘油保存菌(1mL)。

实验结果图片示例


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