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cDNA末端快速克隆

服务内容:

本实验室经过八年反复专研,独创了一套独特的技术应用于5'RACE和3'RACE的扩增。多年的RACE实验经验,RACE作为本公司的核心技术项目之一,我们有信心能为您获得几乎任何一个cDNA的全长序列。

技术简介

        RACE(rapid-amplification of cDNA ends),即cDNA末端快速克隆技术,是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他获得新基因的方法,RACE原理简单、无需建立文库、快速廉价,正受到越来越多科研工作者的重视。


技术原理
        RACE基于PCR技术基础之上,先由RT-PCR从RNA中获取cDNA片段,再通过设计引物向两端延伸PCR扩增获得完整的3'端或5'端序列,是一种从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3’末端的有效方法。 


3'末端RACE

        利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环,把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来(图1)。

5'末端RACE    

        利用一条基因特异性反转录引物,在反转录酶的作用下合成cDNA第一链,将RNA-DNA杂合链中的RNA降解纯化后,利用末端转移酶在cDNA链的3’端加入PolyC尾巴,然后利用锚定引物和一条基因特异性引物扩增(图2)。

服务内容



技术流程



样品与实验结果


注:

1. 请保证材料或者总RNA新鲜,如果基因的含量较低或者未知序列较长,样品量需相应增加;

2. 我们会根据已知序列进行特异性扩增,如果得不到目的序列或为非目的基因的序列,我们将停止实验并收取实验成本费用;如果得到序列与您提供的序列有个别碱基不符,我们在征求您的意见后决定是否进行RACE实验;

3. 我们将设计跨内含子引物PCR检验基因表达水平,如果经验证,样品中基因表达含量低时,我们将与您沟通后,决定下一步实验使用的方法;

4. 对于原核生物RNA 我们仅进行5' RACE。


实验结果图片示例









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