1 基本说明

DH5α是一种常用于质粒克隆的生物工程菌株，在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时， 由于载体DNA产生的LacZα多肽和DH5α编码的lacZ△M15相结合，实现α-互补性，从而显示β-半乳糖苷酶活性。利用这一特性，可以很容易利用蓝白斑筛选鉴别重组体菌株。

本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。本产品被用于DNA的化学转化，经pUC19质粒检测，转化效率可达到10⁸cfu/ug。

2 基因型

F - φ80lacZΔM1 5 Δ(lacZYA-argF) U1 69 deoR recA1 endA1 hsdR1 7 (r k - , m k + ) phoA supE44 λ - thi-1 gyrA96 relA1

3 储存及使用环境

本产品应保存在-70℃，不可反复冻融或放置时间过长，否则会降低转化效率。

进行转化过程中，请根据相应温度及无菌条件的要求进行。

操作方法

请按照无菌条件标准进行以下操作：

1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中置于冰浴中。
（一次转化感受态细胞的建议用量为50μl可以根据实际情况分装使用，应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。）

2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA，100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA（或者10μl以下的连接产物）所饱和，轻轻旋转离心管以混匀内容物在冰浴中静置30分钟。

3. 将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速将管转移到冰浴中使细胞冷却2-3分钟该过程不要摇动离心管。

4. 向每个离心管中加入500μl无菌的LB培养基或者SOC培养基，混匀后置37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟，目的是使菌体复苏，并使质粒上相关的抗性标记基因表达。

5. 复苏的菌体混匀后，吸取100ul均匀涂布于含相应抗生素的LB固体平板上，37℃倒置培养12-16小时。
（涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板。反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少可通过离心4000rpm 2分钟后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可置于4℃保存如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板。）

注意事项与售后服务

1. 请保证感受态细胞正确储存在-70℃低温环境。

2. 请保证转化操作的无菌环境。

3. 如果问题产生是由于感受态本身质量造成的，我们将免费上门替换。

如果您在感受态使用过程中发现任何问题，或者需要一些突发状况的的解决方案，您可以随时联系我们！