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凝胶电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)

服务内容:

DNA或RNA结合蛋白,如转录因子,DNA修饰蛋白研究等。

技术简介

凝胶阻滞或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA结合蛋白质和相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。是检测蛋白质与DNA的相互作用的常用技术,可用于分析转录因子、DNA修饰蛋白等与目标DNA片段的结合。

原理:基于DNA-蛋白质或RNA-蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理,依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物,当蛋白质(转录因子)与特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合蛋白质的DNA或RNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。

 

这一技术最初用于研究DNA结合蛋白质,目前已用于研究RNA结合蛋白质和特定的RNA序列的相互作用。竞争实验中采用含蛋白质结合序列的DNA或RNA探针,和其它相关的探针,来确定它们相互作用的特异性及强度。

 

应用领域

DNA或RNA结合蛋白,如转录因子,DNA修饰蛋白研究等。

服务内容

服务项目

服务内容

实验方案设计

根据研究目的合理设计特异性探针实验组以及非特异性探针对照组,如有必要还可以添加特异性抗体组、特异性核酸竞争组等。

样本制备

可以选择提取样本的总蛋白、核蛋白或者使用纯化好的目的蛋白。对样本蛋白进行定量,实验中等量加入蛋白。

探针制作与标记

客户提供探针DNA或DNA序列信息,我们准备DNA探针并对DNA探针进行标记,检测标记效率,保证达到EMSA实验要求。

目的蛋白表达(可选)

目的蛋白表达载体构建、表达与纯化

DNA EMSA

标记好的探针DNA与蛋白孵育,让蛋白与DNA探针结合。将孵育好的DNA与蛋白质混合物,进行凝胶电泳。转模,显示分析。

Super-Shift EMSA

非纯化的蛋白样本和一个特定的探针可形成一个或几个特异的蛋白复合物。确定复合物中蛋白的特征可能会困难,可以加入目的蛋白的抗体,进行超迁移实验,即Super-Shift EMSA。

技术优势

1. 扎实的科研实施能力,走在学科前沿的技术领头人;

2. 先进的工作平台;

3. 团队多年的是操作经验

服务流程

实验方案设计——样品制备——探针制备——探针与蛋白孵育——凝胶电泳——转膜——检测

 

您需要提供以下材料

1. 纯化后可溶蛋白,至少50ul,浓度大于500ug/ml 浓度高于90%;

2. 探针DNA或探针DNA序列信息。

您将获得的实验结果

1. 剩余DNA探针;

2. 结果分析报告;

3. 最终结果的原始图片和数据;

4. 实验流程说明。

结果图片示例

 

 

 

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